Posted by on 4 grudnia 2018

Pacjent z tym wzorem był zatem heterozygotyczny pod względem podstawienia nukleotydów, który zmienia przewidywaną sekwencję aminokwasów w kodonie 64, powodując zastąpienie tryptofanu przez argininę (TGG . CGG lub Trp64Arg). Rysunek 2. Schemat 2. Schemat receptora .3-adrenergicznego. Każdy aminokwas jest pokazany jako okrąg. Mutacja Trp64Arg pojawia się na początku pierwszej pętli wewnątrzkomórkowej.
Rysunek 3. Rysunek 3. Zastosowanie trawienia enzymami restrykcyjnymi w celu potwierdzenia obecności mutacji Trp64Arg. Panel A pokazuje mapę restrykcyjną produktu PCR o długości 367 bp, stosowanego do trawienia za pomocą Bs tNI. Trawienie normalnej sekwencji daje fragmenty o długości 15, 34, 61, 66, 94 i 97 bp, podczas gdy mutacja Trp64Arg eliminuje jedno z miejsc Bs tNI (linia przerywana), dając nowy 158-bp produkt. Panel B pokazuje żel wybarwiony bromkiem etydyny po trawieniu dwóch próbek DNA Bs tNI. Jeden osobnik był heterozygotyczny pod względem mutacji Trp64Arg w genie receptora .3-adrenergicznego (Trp / Arg), a drugi był homozygotyczny pod względem prawidłowego receptora (Trp / Trp). Zgodnie z przewidywaniami, mutacja wyeliminowała jedno z pięciu miejsc Bs tNI w normalnej sekwencji, powodując powstanie produktu o 158 bp, który normalnie nie występuje.
Dziesięciu Indian Pima z otyłością i NIDDM, z których żadna nie była krewną pierwszego stopnia, badano początkowo pod kątem zmiany w genie receptora .3-adrenergicznego. Analiza jednoniciowych konformacyjnych polimorfizmów ujawniła dwa odmienne wzory w regionie kodującym. Analiza sekwencji dideoksy jednego wariantu (obecnego w 2 z 10 Pimas) ujawniła cichą wymianę cytozyny (C) przez tymidynę (T) w pozycji nukleotydowej 381 (kodon 127, tj. ACCThr . ACTThr). Analiza sekwencji drugiego wariantu (obecnego w 5 z 10 Pimas) ujawniła heterozygotyczny wzór z zastąpieniem tymidyny (T) przez cytozynę (C) w pozycji nukleotydowej 190 (Figura 1A i Figura 1B). Ta zmiana zasad przewiduje zastąpienie tryptofanu (TGG) przez argininę (CGG) w pozycji 64 (Trp64Arg), aminokwasu w pierwszej z trzech wewnątrzkomórkowych pętli receptora (Figura 2). Ta zmiana zasad została potwierdzona przez trawienie enzymami restrykcyjnymi za pomocą BstNI (Figura 3A i Figura 3B). Aby zbadać mutacje, które mogły zostać pominięte w analizie jednoniciowych konformacyjnych polimorfizmów, cały region kodujący genu receptora .3-adrenergicznego został zsekwencjonowany u dwóch dodatkowych Indian Pima za pomocą NIDDM. Nie zidentyfikowano żadnych nowych zmian zasad.
Częstotliwości alleliczne mutacji Trp64Arg u Indian Pima i innych podmiotów
Figura 4. Figura 4. Wykrywanie zmutowanych i normalnych receptorów .3-adrenergicznych przez hybrydyzację z oligonukleotydami specyficznymi dla allelu. Produkty PCR o długości 367 pz obejmujące mutację Trp64Arg u pięciu Indian Pima poddano analizie typu slot blot w dwóch powtórzeniach z sondami oligonukleotydowymi, które swoiście rozpoznają normalny receptor .3-adrenergiczny (sondę Trp64) lub mutację (sondę Arg64), oraz wykonano autoradiografię. Normalne homozygoty (Trp / Trp), heterozygoty (Trp / Arg) i homozygoty Trp64Arg (Arg / Arg) można było szybko wykryć w tym teście.
Tabela 1
[patrz też: peeling kwasem salicylowym, kolka trzustkowa, ile czeka się na sanatorium z nfz ]

Powiązane tematy z artykułem: ile czeka się na sanatorium z nfz kolka trzustkowa peeling kwasem salicylowym

Posted by on 4 grudnia 2018

Pacjent z tym wzorem był zatem heterozygotyczny pod względem podstawienia nukleotydów, który zmienia przewidywaną sekwencję aminokwasów w kodonie 64, powodując zastąpienie tryptofanu przez argininę (TGG . CGG lub Trp64Arg). Rysunek 2. Schemat 2. Schemat receptora .3-adrenergicznego. Każdy aminokwas jest pokazany jako okrąg. Mutacja Trp64Arg pojawia się na początku pierwszej pętli wewnątrzkomórkowej.
Rysunek 3. Rysunek 3. Zastosowanie trawienia enzymami restrykcyjnymi w celu potwierdzenia obecności mutacji Trp64Arg. Panel A pokazuje mapę restrykcyjną produktu PCR o długości 367 bp, stosowanego do trawienia za pomocą Bs tNI. Trawienie normalnej sekwencji daje fragmenty o długości 15, 34, 61, 66, 94 i 97 bp, podczas gdy mutacja Trp64Arg eliminuje jedno z miejsc Bs tNI (linia przerywana), dając nowy 158-bp produkt. Panel B pokazuje żel wybarwiony bromkiem etydyny po trawieniu dwóch próbek DNA Bs tNI. Jeden osobnik był heterozygotyczny pod względem mutacji Trp64Arg w genie receptora .3-adrenergicznego (Trp / Arg), a drugi był homozygotyczny pod względem prawidłowego receptora (Trp / Trp). Zgodnie z przewidywaniami, mutacja wyeliminowała jedno z pięciu miejsc Bs tNI w normalnej sekwencji, powodując powstanie produktu o 158 bp, który normalnie nie występuje.
Dziesięciu Indian Pima z otyłością i NIDDM, z których żadna nie była krewną pierwszego stopnia, badano początkowo pod kątem zmiany w genie receptora .3-adrenergicznego. Analiza jednoniciowych konformacyjnych polimorfizmów ujawniła dwa odmienne wzory w regionie kodującym. Analiza sekwencji dideoksy jednego wariantu (obecnego w 2 z 10 Pimas) ujawniła cichą wymianę cytozyny (C) przez tymidynę (T) w pozycji nukleotydowej 381 (kodon 127, tj. ACCThr . ACTThr). Analiza sekwencji drugiego wariantu (obecnego w 5 z 10 Pimas) ujawniła heterozygotyczny wzór z zastąpieniem tymidyny (T) przez cytozynę (C) w pozycji nukleotydowej 190 (Figura 1A i Figura 1B). Ta zmiana zasad przewiduje zastąpienie tryptofanu (TGG) przez argininę (CGG) w pozycji 64 (Trp64Arg), aminokwasu w pierwszej z trzech wewnątrzkomórkowych pętli receptora (Figura 2). Ta zmiana zasad została potwierdzona przez trawienie enzymami restrykcyjnymi za pomocą BstNI (Figura 3A i Figura 3B). Aby zbadać mutacje, które mogły zostać pominięte w analizie jednoniciowych konformacyjnych polimorfizmów, cały region kodujący genu receptora .3-adrenergicznego został zsekwencjonowany u dwóch dodatkowych Indian Pima za pomocą NIDDM. Nie zidentyfikowano żadnych nowych zmian zasad.
Częstotliwości alleliczne mutacji Trp64Arg u Indian Pima i innych podmiotów
Figura 4. Figura 4. Wykrywanie zmutowanych i normalnych receptorów .3-adrenergicznych przez hybrydyzację z oligonukleotydami specyficznymi dla allelu. Produkty PCR o długości 367 pz obejmujące mutację Trp64Arg u pięciu Indian Pima poddano analizie typu slot blot w dwóch powtórzeniach z sondami oligonukleotydowymi, które swoiście rozpoznają normalny receptor .3-adrenergiczny (sondę Trp64) lub mutację (sondę Arg64), oraz wykonano autoradiografię. Normalne homozygoty (Trp / Trp), heterozygoty (Trp / Arg) i homozygoty Trp64Arg (Arg / Arg) można było szybko wykryć w tym teście.
Tabela 1
[patrz też: peeling kwasem salicylowym, kolka trzustkowa, ile czeka się na sanatorium z nfz ]

Powiązane tematy z artykułem: ile czeka się na sanatorium z nfz kolka trzustkowa peeling kwasem salicylowym