Posted by on 28 maja 2018

Grot strzałki wskazuje immunoreaktywne pasmo uzyskane przy użyciu przeciwciała anty-BSEP w lizatach błony z komórek Sf9 wykazujących ekspresję BSEP. Panel B pokazuje wyniki analizy zależnego od ATP wychwytu taurocholanu znakowanego 3H w pęcherzykach błonowych zawierających ludzki BSEP w obecności soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS), cyklosporyny (20 .M) lub próbek surowicy od pacjentów i kontroli (rozcieńczenie, 1:75). Pobieranie taurocholanu znakowanego 3H mierzono przez inkubowanie próbek przez 10 minut w 37 ° C w obecności i przy braku 4 mM ATP. Każdy punkt danych reprezentuje średnią wartość potrójnych pomiarów. Średnio poziomy cyklosporyny w rozcieńczonych próbkach surowicy wynosiły 1/20 000 poziomów w próbce kontrolnej stosowanej do testowania indukowanego lekami hamowania aktywności BSEP. T bary i I słupki wskazują odchylenia standardowe. Aby przetestować hipotezę, że te przeciwciała kanałowe były skierowane przeciwko BSEP, próbki surowicy od każdego z trzech pacjentów analizowano za pomocą immunoblottingu z białkami błonowymi z komórek owadzich Sf9 wyrażających ludzki BSEP lub ludzki MRP1. Przeciwciało poliklonalne przeciwko ludzkiemu BSEP poddawanemu immunoreagacji z białkiem około 140 kD w lizatach błony z komórek Sf9 wykazujących ekspresję BSEP. Wszystkie próbki surowicy były w przeważającej mierze immunoreaktywowane białkiem o tej samej masie cząsteczkowej (rysunek 2A). To immunoreaktywne pasmo nie było wizualizowane w kontrolnych lizatach z komórek wyrażających MRP1.
Aby uzasadnić związek między dysfunkcją cholestatycznego przeszczepu a obecnością przeciwciał anty-BSEP, przetestowaliśmy próbki surowicy od grupy kontrolnej dzieci (Pacjenci 4, 5 i 6), którzy przeszli transplantację wątroby z powodu ciężkiego niedoboru BSEP i którzy nie przeszli transplantacji wątroby. mieć nawrót choroby przez średni okres obserwacji 5,5 roku (patrz dodatek dodatkowy, dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu). Próbki surowicy od dwojga dzieci, które przeszły przeszczep wątroby w celu pozawątrobowej atrezji dróg żółciowych i były zdrowe przez 5 lat po transplantacji, zostały użyte jako dodatkowe kontrole. Żadna z próbek kontrolnych nie wykazywała dodatniego wyniku w przypadku przeciwciał przeciwkrzepliwych (Figura 1D) lub przeciwciał anty-BSEP (Figura 2A).
Następnie ustaliliśmy, czy krążące przeciwciała anty-BSEP mogą zakłócać funkcję BSEP w przeszczepach, stosując test transportu kwasów żółciowych z wewnętrznymi pęcherzykami błonowymi z komórek Sf9 wyrażających BSEP. Zależny od ATP wychwyt pęcherzyków znakowanego 3H taurocholanu (średnia [. SD], 27,5 . 1,7 pmola na miligram białka na minutę) nie był pod wpływem preinkubacji z próbkami surowicy z jakiejkolwiek kontroli, ale był całkowicie hamowany przez preinkubację z cyklosporyną , konkurencyjny inhibitor BSEP, 13 i przez preinkubację z próbkami surowicy od każdego Pacjenta 1, 2 i 3 (Figura 2B).
Rycina 3. Rycina 3. Osadzanie się przeciwciał przeciw surowicy pochodzenia żółciowego (BSEP) lub surowicy od pacjentów z żółcią kanadyjską i zaburzenie wydzielania żółci z kwasów żółciowych. Szczurom podawano dożylnie w każdym z 2 kolejnych dni królicze przeciwciało anty-ludzkie BSEP (trzy szczury) lub surowicę od Pacjenta 2 (trzy szczury). Sól fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS) i ludzką IgG podano jako odpowiednie kontrole (trzy szczury na grupę)
[więcej w: patriotyczna odzież, zagęszczanie rzęs, przedłużanie rzęs ]

Powiązane tematy z artykułem: patriotyczna odzież przedłużanie rzęs zagęszczanie rzęs

Posted by on 28 maja 2018

Grot strzałki wskazuje immunoreaktywne pasmo uzyskane przy użyciu przeciwciała anty-BSEP w lizatach błony z komórek Sf9 wykazujących ekspresję BSEP. Panel B pokazuje wyniki analizy zależnego od ATP wychwytu taurocholanu znakowanego 3H w pęcherzykach błonowych zawierających ludzki BSEP w obecności soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS), cyklosporyny (20 .M) lub próbek surowicy od pacjentów i kontroli (rozcieńczenie, 1:75). Pobieranie taurocholanu znakowanego 3H mierzono przez inkubowanie próbek przez 10 minut w 37 ° C w obecności i przy braku 4 mM ATP. Każdy punkt danych reprezentuje średnią wartość potrójnych pomiarów. Średnio poziomy cyklosporyny w rozcieńczonych próbkach surowicy wynosiły 1/20 000 poziomów w próbce kontrolnej stosowanej do testowania indukowanego lekami hamowania aktywności BSEP. T bary i I słupki wskazują odchylenia standardowe. Aby przetestować hipotezę, że te przeciwciała kanałowe były skierowane przeciwko BSEP, próbki surowicy od każdego z trzech pacjentów analizowano za pomocą immunoblottingu z białkami błonowymi z komórek owadzich Sf9 wyrażających ludzki BSEP lub ludzki MRP1. Przeciwciało poliklonalne przeciwko ludzkiemu BSEP poddawanemu immunoreagacji z białkiem około 140 kD w lizatach błony z komórek Sf9 wykazujących ekspresję BSEP. Wszystkie próbki surowicy były w przeważającej mierze immunoreaktywowane białkiem o tej samej masie cząsteczkowej (rysunek 2A). To immunoreaktywne pasmo nie było wizualizowane w kontrolnych lizatach z komórek wyrażających MRP1.
Aby uzasadnić związek między dysfunkcją cholestatycznego przeszczepu a obecnością przeciwciał anty-BSEP, przetestowaliśmy próbki surowicy od grupy kontrolnej dzieci (Pacjenci 4, 5 i 6), którzy przeszli transplantację wątroby z powodu ciężkiego niedoboru BSEP i którzy nie przeszli transplantacji wątroby. mieć nawrót choroby przez średni okres obserwacji 5,5 roku (patrz dodatek dodatkowy, dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu). Próbki surowicy od dwojga dzieci, które przeszły przeszczep wątroby w celu pozawątrobowej atrezji dróg żółciowych i były zdrowe przez 5 lat po transplantacji, zostały użyte jako dodatkowe kontrole. Żadna z próbek kontrolnych nie wykazywała dodatniego wyniku w przypadku przeciwciał przeciwkrzepliwych (Figura 1D) lub przeciwciał anty-BSEP (Figura 2A).
Następnie ustaliliśmy, czy krążące przeciwciała anty-BSEP mogą zakłócać funkcję BSEP w przeszczepach, stosując test transportu kwasów żółciowych z wewnętrznymi pęcherzykami błonowymi z komórek Sf9 wyrażających BSEP. Zależny od ATP wychwyt pęcherzyków znakowanego 3H taurocholanu (średnia [. SD], 27,5 . 1,7 pmola na miligram białka na minutę) nie był pod wpływem preinkubacji z próbkami surowicy z jakiejkolwiek kontroli, ale był całkowicie hamowany przez preinkubację z cyklosporyną , konkurencyjny inhibitor BSEP, 13 i przez preinkubację z próbkami surowicy od każdego Pacjenta 1, 2 i 3 (Figura 2B).
Rycina 3. Rycina 3. Osadzanie się przeciwciał przeciw surowicy pochodzenia żółciowego (BSEP) lub surowicy od pacjentów z żółcią kanadyjską i zaburzenie wydzielania żółci z kwasów żółciowych. Szczurom podawano dożylnie w każdym z 2 kolejnych dni królicze przeciwciało anty-ludzkie BSEP (trzy szczury) lub surowicę od Pacjenta 2 (trzy szczury). Sól fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS) i ludzką IgG podano jako odpowiednie kontrole (trzy szczury na grupę)
[więcej w: patriotyczna odzież, zagęszczanie rzęs, przedłużanie rzęs ]

Powiązane tematy z artykułem: patriotyczna odzież przedłużanie rzęs zagęszczanie rzęs